1．下列有关细胞工程的叙述，正确的是(　　)

A．细胞工程在细胞器水平上定向改变细胞核的遗传物质

B．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能

C．动植物细胞融合都可以使用灭活病毒进行诱导

D．动物细胞融合技术最重要的用途是生产杂种细胞

2．既可用于基因重组技术又可用于细胞融合技术的是(　　)

A．病毒　　　B．纤维素酶 C．聚乙二醇 D．质粒

3．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用的技术与原理不相符的是(　　)

A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性

B．植物细胞培养与动物细胞培养——细胞的全能性

C．原生质体融合与动物细胞融合——生物膜的流动性

D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂

4．名为“我的皮肤”的生物活性绷带自从在英国诞生后，给皮肤烧伤病人带来了福音。该活性绷带的原理是先采集一些细胞样本，再让其在特殊的膜片上增殖。5～7天后，将膜片敷在患者的伤口上，膜片会将细胞逐渐“释放”到伤口，并促进新生皮肤层生长，达到加速伤口愈合的目的。下列有关叙述中，不正确的是(　　)

A．“我的皮肤”的获得技术属于动物细胞工程

B．人的皮肤烧伤后会因人体第二道防线的破坏而导致免疫力下降

C．种植在膜片上的细胞样本最好选自患者本人

D．膜片能否把细胞顺利“释放”到伤口，加速患者自身皮肤愈合与细胞膜上的HLA有关

5．运用下列各种细胞工程技术培育生物新品种，操作过程中能形成愈伤组织的是（　　）。

①植物组织培养　②植物体细胞杂交　③动物细胞培养　④转基因植物的培育

A．①②③ B．①②④ C．①③④ D．①②③④

6．下列关于细胞工程的叙述，错误的是（　　）。

A．电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合

B．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理

C．小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体

D．某种植物甲、乙两品种的体细胞杂种与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目相同

7．下列关于现代生物技术应用的叙述，错误的是（　　）。

A．蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质

B．体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体

C．植物组织培养技术可用于作物脱毒D．动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育

8．某同学在学习“细胞工程”时，列表从四方面比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为错误的有几方面？（　　）

比较内容

植物细胞工程

动物细胞工程



特殊处理

酶解法去除细胞壁

用胰蛋白酶处

理后制成细胞悬液



融合方法

物理方法、化学方

法、生物方法

物理方法、化学方法



典型应用

人工种子、种

间杂种植物

单克隆抗体的制备



培养基区别

麦芽糖是离体组

织赖以生长的成分

动物血清不可缺少



A．0处 B．1处 C．2处 D．4处

9．在现代生物科技的应用中，不需要进行检测与筛选的是（　　）。

A．对植物的离体组织进行培养，大规模培育优良品种

B．将鼠的骨髓瘤细胞与已免疫的B淋巴细胞融合，制备单克隆抗体

C．利用植物体细胞杂交技术培育“萝卜—甘蓝”

D．将抗虫基因导入植物细胞，培育具有抗虫特性的新植株

10．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（　　）。

A．培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞

B．克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变

C．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D．恶性细胞系的细胞可进行传代培养

11．经植物组织培养技术培养出来的植物一般很少有植物病毒危害，其原因在于（　　）。

A．在组织培养过程中经过了脱分化和再分化，进行的是快速分裂和分化

B．人工配制的培养基上，植物病毒根本无法生存

C．进行组织培养用的材料是刚分裂产生的茎尖、根尖或芽尖

D．接种组织培养之前进行了严格的消毒处理

12．科研人员将抗癌药物连接在单克隆抗体上制成“生物导弹”，用于癌症治疗。“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是“杀伤性弹头”，分析下列有关描述，其中不正确的是（　　）。

A．“瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成

B．“弹头”由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成

C．“生物导弹”疗效高，但毒副作用大

D．“生物导弹”的制备应用了细胞工程13．进行生物工程设计时，下表各组所选择的实验材料与实验目的配置错误的是（　　）。

组别

实验目的

实验材料

材料特点



1

动物细胞核移植

卵（母）细胞

细胞大，细胞质能有效调控核发育



2

体细胞诱变育种

愈伤组织细胞

分裂能力强，易诱发突变



3

植物体细胞杂交培育新品种

花粉粒

易于获取，

易于培养



4

烧伤患者皮肤细胞移植

自体皮肤生发层细胞

分裂能力强，且不会引起免疫排斥



A．1 B．2 C．3 D．4

14．在植物细胞工程的技术中，无需激素调节的是（　　）。

A．组织培养中促使细胞脱分化 B．制备原生质体时去除细胞壁

C．组织培养中促使细胞再分化 D．促使融合细胞形成愈伤组织

A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同B．有无血清对正常细胞培养的影响不同

C．培养基中补充血清有助于正常细胞的培养

D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大

16．单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基

上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在HAT培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是 （ ）

A．骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞 B．脾细胞之间形成的融合细胞

C．骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D．脾细胞

17．研究单克隆抗体治疗癌症的思路是 （ ）

A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞

C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成

D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合

18．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （　 ）A.容易产生各种变异 B．具有更强的全能性 C.取材十分方便 D．分裂增殖的能力强

19．动物细胞融合和植物原生质融合决定于 （　 ）A.细胞膜的流动性 B．细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性　D．细胞质酶的活性20．关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是 （　 ）

A．可以制成诊断盒．用于疾病的诊断 B．可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗

C．可以利用基因工程技术生产 D．可以在生物体内生产，不能体外生产

21．在下列自然现象或科学研究成果中，能为“动物细胞具有全能性”观点提供直接证据的是(　　)

A．壁虎断尾后重新长出尾部B．蜜蜂的未受精卵细胞发育成雄蜂

C．用体外培养的皮肤治疗烧伤病人D．小鼠腺细胞的自我复制

22．某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行培养，下列叙述正确的是(　　)

A．制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理

B．肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸

C．为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素

D．用血球计数板计数的方法，可推断乙细胞比甲细胞增殖周期长

23．胡萝卜的组织培养过程中进行无菌操作的步骤是 (　　)

①超净工作台　②自来水冲洗　③酒精棉球擦手　④无菌水清洗　⑤次氯酸钠溶液清洗　⑥无菌滤纸处理 ⑦培养基灭菌　⑧不经灭菌的培养基

A．①②④⑤③⑥⑦ B．①③④⑤⑥⑦ C．①②④⑤⑥⑦ D．①②④⑤⑦

24．利用生物工程改造生物特性，从而生产人类所需的产品。下列有关措施的叙述中，不正确的是 (　　)

A．利用基因突变原理培育成青霉素高产菌株

B．利用基因突变原理培育成生产人干扰素的酵母菌

C．利用基因工程手段培育成生产人胰岛素的大肠杆菌

D．利用细胞工程技术培育成生产单克隆抗体的细胞系

25.上海医学研究所成功培育出第一头携带人蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药用蛋白含量他旮旯30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是（ ）

A．转基因动物是指体细胞中出现了新基因的动物

B．提高基因表达水平是指设法是牛的乳腺细胞中含有更多的人蛋白基因

C．只在转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中是纯和

D．转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，故不合成人白蛋白

26.如果科学家通过转基因工程，成功地把一位女性血友病患者的造血细胞进行改造，使其凝血功能恢复正常，那么，后来她所生的儿子中

A．全部正常 B.一半正常 C.全部有病 D.不能确定

27.下图为通过DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆示意图。下列叙述正确的是

A根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目

B外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制

C重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接

D放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置

28.某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述，错误的是

A．消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害

B．在愈伤组织培培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞

C．出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控

D．生根时，培养基通常应含α—萘乙酸等生长素类调节剂

29、α1-抗胰蛋白酶缺乏症是北美常见的一种单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更容易获得这种酶。

下列关于该过程的叙述中错误的是(　　)

A．载体上绿色荧光蛋白基因(GFP)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞

B．将目的基因导入羊膀胱细胞中，将会更加容易得到α1-抗胰蛋白酶

C．培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因，故该羊有性生殖产生的后代也都能产生α1-抗胰蛋白酶

D．目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用

30. 限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示：D

请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是

31．下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，有关说法错误的是：

A．催化过程②的酶是逆转录酶，过程③④⑤利用PCR技术

B．B上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的受体细胞

C．催化过程⑦的DNA连接酶的作用是促使碱基之间形成氢键

D．⑨过程一般是在液体培养基上进行的

32．20世纪90年代开始兴起的DNA疫苗被称为第三次疫苗革命，医学专家将含病毒抗原基因的重组质粒注入人体表达后使人获得免疫能力。下列叙述不正确的是

A.重组质粒在内环境中表达后引起机体免疫反应

B.病毒抗原基因在体内表达时需要RNA聚合酶

C.病毒抗原基因与质粒重组时需要DNA连接酶

D.注射DNA疫苗后机体会产生相应的记忆细胞

33基因芯片的测序原理是DNA分子杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法。先在一块基片表面固定序列已知的八核苷酸的探针，当溶液中带有荧光标记的靶核酸序列，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列TATGCAATCTAG（过程见图1）。若靶核酸序列与八核苷酸的探针杂交后，荧光强度最强的探针位置如图2所示，请分析溶液中靶序列为

A．AGCCTAGCTGAA B．TCGGATCGACTT

C．ATCGACTT D．TAGCTGAA

34．下列关于基因检测疾病的叙述不正确的是（ ）

A.可以用测定基因表达产物—蛋白质的方法达到基因检测的目的

B.生物芯片的广泛使用，使基因及其表达产物的检测更加快速简便

C.基因检测疾病带来的负面影响主要是基因歧视

D.基因检测疾病时，一次只能检测一种疾病，十分麻烦

35．水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly和Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（ ）

A.促使目的基因导入受体细胞中 B.促使目的基因在受体细胞中复制

C.筛选出获得目的基因的受体细胞 D.使目的基因容易成功表达

36．云南农业大学研究人员培育出10头猪蹄发荧光的转基因猪。主要研究过程是：①将瘦素基因与绿色荧光蛋白基因导入猪胎儿成纤维细胞；②将转基因的成纤维细胞核移植到去核的猪卵母细胞，并培育形成早期胚胎；③将胚胎移植到代孕母猪体内，最终获得转基因猪。在这一过程中不必进行的是（ ）

A．将瘦素基因与绿色荧光蛋白基因拼接，并构建基因表达载体

B．培养并筛选处于减数第二次分裂中期的猪次级卵母细胞

C．筛选出转基因猪胎儿成纤维细胞和转基因克隆胚胎

D．给代孕母猪注射环孢霉素A阻止T细胞增殖，以利于代孕母猪接受胚胎

37．下列有关克隆技术的叙述，不正确的是( )

A．动物细胞融合过程中可用灭活的病毒、聚乙二醇（PEG）等

B．动物细胞培养过程中，常用幼龄动物为材料

C．植物组织培养过程中，需要用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁

D．植物体细胞杂交过程中，需用不同浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种体细胞

38．下列属于克隆的是 ( )

①将表达载体在受体细胞中进行扩增 ②由一个细胞经过有丝分裂形成细胞群

③运用体细胞核移植技术和胚胎分割技术产生的动物

④由一个细菌分裂出多个和它完全一样的细菌而形成菌落

A．①②③ B．①③④ C．②③④ D．①②③④

39．科学家将鱼的体细胞核植入雌鱼去核的卵细胞中，该卵细胞可培育为克隆鱼。下图中，能正确表示动物克隆技术原理的是………………………………………（ ）

A B C D

40．关于植物细胞培养和动物细胞培养，下列说法正确的是

A．都必须无菌、无毒环境 B．都必须从单个细胞开始

C．都必须使用液体培养基 D．原理都是细胞的全能性

41．“筛选”是很多生物试验过程中的重要环节。下列叙述中错误的是

A．单倍体育种中筛选杂种植株的花粉 B．多倍体育种中筛选秋水仙素处理后的植株

C．单克隆抗体制备过程中需要两次筛选D．基因工程中筛选含有目的基因的受体细胞

42.利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素，下列相关叙述正确的是( )

A．人和大肠杆菌在合成胰岛素时，转录和翻译的场所都是相同的

B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

C．通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌

D．选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高

43.应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是

A．用于检测疾病的医疗器械B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C．合成β-珠蛋白的DNA D．合成苯丙羟化酶的DNA片段

44.某线性DNA分子含有5000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如下图所示。下列有关说法不正确的

A．在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列分别有3个和2个B．a酶与b酶切出的黏性末端不能相互连接C．a酶与b酶切断的化学键相同D．用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，序列会明显增多

45.动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是

A．动物细胞培养 B．动物细胞融合 C．单克隆杭体 D．胚胎、核移植

46.细胞工程中，选择合适的生物材料是成功的关键。下列选择不合理的是

A．选择高度分化的动物体细胞进行培养有利于获得大量细胞B．选择胚胎细胞作为核供体进行核移植可提高克隆动物的成功率C．选择一定大小的植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗D．选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得优质的突变体

47.某实验室做了下图所示的实验研究。下列相关叙述，正确的是 ( 　 　 )

A ．过程 ④ 产生的单抗，不需细胞膜上载体蛋白的协助就能释放到细胞外

B ．与纤维母细胞相比，过程 ① 形成的诱导干细胞的全能性较低

C ．过程 ② 是诱导干细胞的结构和遗传物质发生稳定性差异的过程

D ．每个 Y 细胞只产生一种抗体，故过程 ③ 不需用选择性培养基进行筛选

48.在改变培养基中IAA（生长素）与KT（一种人工合成的细胞分裂素）的比例时，可改变烟草愈伤组织的分化方向，如下表所示．下列相关叙述正确的是（　　）

激素添加量（mg?L-1）

IAA

3

3

0.03

-





KT

0.2

0.02

1

0.2



生长状况

愈伤组织

生根

茎叶分化

无生长



A．愈伤组织分化成为根、茎和叶的过程叫脱分化B．培养基中添加IAA可以促进生长和生根C．只要培养基中添加KT，细胞就能分裂D．培养基中添加的IAA与KT的比值较高时，有利于茎叶的形成

49.下列有关转基因食品和转基因生物的叙述中，正确的是

A. 转基因食品只能用作牲畜饲料B. 目前对转基因食品的安全性仍然存在争议C. 转基因食品与非转基因食品的营养物质种类差别很大D. 目前我国对农业转基因生物的研究和试验尚未作出具体规定

50.超氧化物歧化酶（SOD）是一种源于生命体的活性物质。下图为人工培育含SOD植物新品种的过程，相关叙述正确的是

A．①过程可用基因枪法导入SOD基因 B．②、③过程所用的激素种类和比例都相同

C．SOD催化反应的机制是为反应提供活化能 D．图示育种过程体现了植物细胞的全能性

二、简答题（本题包括5小题，共50分）

51．嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶

(1)PCR扩增bglB基因时，选用 基因组DNA作模板。

(2)右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识别序列。

Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响

(3)据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 （单选）。

A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃

52.人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：

（1）过程①代表的过程是????。过程②代表的过程是?????????????

（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用??????、 ?????两种工具酶。

（3）过程⑥发生的生理过程是??????????、????????????

（4）过程⑦的实验技术名称是????????????，过程⑦依据的原理是 ??????????。需用 ?????????????促进X的形成。

（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的??????所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒? 进行比较；或用图中的????????进行特异性结合检测。

53.2012年10月8日，瑞典卡罗琳斯卡医学院宣布，将2012年度诺贝尔生理学或医学奖授予 英国科学家约翰?格登和日本科学家山中伸弥，以表彰他们“发现成熟细胞可以被重新编 程为多功能的干细胞”，使人类对细胞和器官发育的认识发生了革命性的变化。通过转入 特定基因，可将体细胞诱导形成多能干细胞(iPS细胞）。iPS细胞与胚胎干细胞相似，可以 产生各种类型的体细胞。下图是应用iPS细胞技术治疗镰刀型细胞贫血症的技术流程。 请回答：

(1)过程①是在体外分离患者的体细胞，需要用_______处理，才能分散成单个细胞;在培养患者体细胞时，通常要在细胞培养液中添加一定量的_____，以防培养过程遭受细菌的污染。

(2)过程②是利用病毒，将4个目的基因（Oct4、Sox2、Klf4和c - Myc)导入患者体细胞，使其转化成iPS细胞。在这一过程中，迅速扩增4个目的基因的常用技术是_______。然后将4个目的基因与逆转录病毒结合,再将其导入患者的体细胞。在这一过程中,逆转录病 毒所起的作用是______________。

(3)与过程③的遗传学原理相同的过程是过程_______

(4)过程④的本质是_______。

(5)过程⑤用于移植治疗的造血干细胞的遗传物质与患者的遗传物质相比,其特点是: _______用于移植治疗时,是否会发生免疫排斥反应？ _____________________

54．人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图1是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，图2表示杂种细胞中基因的存在与人体染色体间的关系（注：“+”表示有，“—”表示无），请分析回答：



杂种细胞系







一

二

三

四

五



小鼠

基因

A

-

+

-

+

-





B

+

-

-

+

-





C

-

+

-

+

-



小鼠

染色体

1

+

-

-

+

-





2

-

+

-

+

-





3

-

-

+

+

-





（1）制备单克隆抗体用到的生物学技术有 。图1中给小鼠注射的HCG相当于 ，①过程常采用的方法有 （至少答2点）。

（2）科研人员发现形成的杂种细胞中小鼠的染色体会随机丢失，各种杂种细胞保留小鼠染色体的种类和数量是不同的，对杂种细胞进行染色体和基因关系分析的结果如图2。据此推测，2号染色体上有 基因，能无限增殖的各种细胞系有 。

（3）在④之前要进行抗体筛选的目的是 ，在此过程生产的单克隆抗体可以与 特异性结合，从而诊断早孕。

55.下图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转人赖氨酸基因的克隆 牛“织女”的大致过程，请据图回答问题。

(1)克隆牛“织女”的诞生过程中涉及到的细胞水平的现代生物技术主要有:_________ (至少答出两项）

(2)实施基因工程包括四个基本操作步骤，其核心步骤是_______，实现②过程的常用方法是_______