一、单项选择题（本题共40小题，每小题1.5分，共60分）

1．基因工程的正确操作步骤是(　　)

①使目的基因与载体相结合 ②将目的基因导入受体细胞

③验证目的基因的表达是否符合特定性状要求 ④提取目的基因

A．③②④①　　　B．②④①③ C．④①②③ D．③④①②

2．下列获取目的基因的方法中需要模板的是(　　)

①从基因文库中获取目的基因　②利用PCR技术扩增目的基因　③反转录法　

④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成DNA

A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③

3．聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是(　)

A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现

B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成

C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸

D．PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高

下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是(　　)

A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行

C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的首端

5．某生化所合成了一种具有镇痛作用而又不会像吗啡那样使病人上瘾的药物——脑啡肽多糖(类似于人体中的糖蛋白)。在人体细胞中糖蛋白必须经过内质网和高尔基体的进一步加工才能形成。如果要采用基因工程和发酵工程技术让微生物来生产脑啡肽多糖，应该用下列哪种微生物作受体细胞(　　)

A．大肠杆菌 B．酵母菌 C．T4噬菌体 D．大肠杆菌质粒

6．某遗传研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高了30多倍，标志着我国转基因研究向产业化的目标又迈进了一大步。以下有关的叙述中，正确的是(　　)

A．人白蛋白基因开始转录时，在DNA聚合酶的作用下以DNA分子的一条链为模板合成mRNA

B．所谓“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因

C．人们只能在转基因牛的乳汁中获取到人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在转基因牛的乳腺细胞中是纯合的，在其他细胞中则是杂合的

D．如果人白蛋白基因的序列是已知的，可以用化学方法合成该目的基因

7．有关基因工程叙述正确的是(　　)

A．限制酶只在获取目的基因时才用 B．重组质粒的形成是在细胞内完成的

C．质粒都可以作为运载体 D．蛋白质的氨基酸排列顺序可能为合成目的基因提供线索

8．PCR技术扩增DNA，需要的条件是(　　)

①目的基因　②引物　③四种脱氧核苷酸　④耐高温的DNA聚合酶　⑤mRNA　

⑥核糖体　⑦能量

A．②③④⑤⑥　　　 B．①③④⑦ C．①②③⑤⑥ D．①②③④⑦

9．下列关于基因表达载体的构建描述错误的是(　　)

A．基因表达载体的构建是基因工程的核心

B．基因表达载体的构建包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分

C．目的基因就是指编码蛋白质的结构基因 D．构建的基因表达载体都是相同的

10．基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是(　　)

A．结构简单，操作方便 B．繁殖速度快

C．遗传物质含量少、简单 D．性状稳定，变异少

11．下列关于目的基因导入受体细胞的描述不正确的是(　　)

A．基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效

B．显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法

C．大肠杆菌最常用的转化方法是：使细胞的生理状态发生改变

D．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法

12.下列哪项表述说明了目的基因成功的表达了其遗传特性(　　)

A．用DNA探针检测目的基因出现杂交带 B．用DNA探针检测mRNA出现杂交带

C．用抗原—抗体杂交检测蛋白质出现杂交带 D．以上都不能说明

13．目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是(　　)

①检测受体细胞是否有目的基因　②检测受体细胞是否有致病基因　③检测目的基因是否转录出mRNA　④检测目的基因是否翻译成蛋白质

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④

14．在基因工程的操作过程中，获得重组质粒不需要(　　)

①DNA连接酶　②同一种限制酶　③RNA聚合酶　④具有标记基因的质粒　

⑤目的基因　⑥4种脱氧核苷酸

A．③⑥ B．②④ C．①⑤ D．①②④

15．在基因工程操作过程中，E·coli DNA连接酶的作用是（ ）

A. 将任意两个DNA分子连接起来

B. 连接具有相同黏性末端的DNA分子，包括DNA分子的基本骨架和碱基对之间的氢键

C. 只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键

D. 只连接具有相同黏性末端的DNA分子碱基对之间的氢键

16．下列关于基因工程的叙述，错误的是(　　)

A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物

B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶

C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性

D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达

17．基因工程技术也称DNA重组技术，其实施必须具备的4个必要条件是(　　)

A．工具酶、目的基因、运载体、受体细胞

B．重组DNA、RNA聚合酶、内切酶、连接酶

C．模板DNA、信使RNA、质粒、受体细胞

D．目的基因、限制性内切酶、运载体、体细胞

下列关于限制酶的说法正确的是(　　)

A．限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少

B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

C．不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端

D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键

19．镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变。检测这种碱基序列改变必须使用的酶是(　　)

A．解旋酶　　　 B．DNA连接酶 C．限制酶 D．RNA聚合酶

20．由于质粒与目的基因具有相同的黏性末端，结合过程中不可能出现下列哪种情况( )

A．形成环状的外源DNA B．可能形成环状的载体DNA

C．可能出现重组DNA D．只出现重组DNA

21．在基因工程技术中，需要用氯化钙处理的步骤是(　　)

A．目的基因的提取 B．目的基因与载体结合

C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测与表达

22．目前科学家把兔子血红蛋白基因导入大肠杆菌细胞中，在大肠杆菌细胞中合成了兔子的血红蛋白，下列哪一项不是这一先进技术的理论依据(　　)

A．所有生物共用一套遗传密码 B．基因能控制蛋白质的合成

C．兔子血红蛋白基因与大肠杆菌的DNA都是由四种脱氧核苷酸构成，都遵循相同的碱基互补配对原则

D．兔子与大肠杆菌有共同的原始祖先

23．现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，用KpnⅠ单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是(　　)

24．对基因组文库的描述，不正确的是(　　)

A．含有某种生物的全部基因 B．基因中含有启动子和内含子

C．文库的基因是通过受体菌承载的 D．文库中的全部基因可以在物种间交流

25．某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a，通过基因工程的方法，将基因a与载体结合后导入马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。下列有关这一过程的叙述不正确的是(　　)

A．获取基因a的限制酶的作用部位是图中的①

B．连接基因a与载体的DNA连接酶的作用部位是图中的②

C．基因a进入马铃薯细胞后，可随马铃薯DNA分子的复制

而复制，传给子代细胞

D．通过该技术人类实现了定向改造马铃薯的遗传性状

26．人们试图利用基因工程的方法，用乙种生物生产甲种生物的一种蛋白质。生产流程是：

甲生物的蛋白质―→mRNA目的基因与质粒DNA重组导入乙细胞获得甲生物的蛋白质

下列说法正确的是(　　)

A．①过程需要的酶是逆转录酶，原料是A、U、G、C

B．②要用限制性内切酶切断质粒DNA，再用DNA连接酶将目的基因与质粒连接在一起

C．如果受体细胞是动物细胞，③过程可用农杆菌转化法

D．④过程中用的原料不含有A、U、G、C

27．不属于利用基因工程方法生产的药物是(　　)

A．干扰素　　　　 B．白细胞介素 C．青霉素 D．乙肝疫苗

28．关于基因工程和蛋白质工程的说法正确的是(　　)

A．蛋白质工程就是改造蛋白质的分子结构

B．基因工程就是改造基因的分子结构

C．都是分子水平上的操作

D．基因工程能创造出自然界根本不存在的基因，蛋白质工程能创造出自然界根本不存在的蛋白质

29．如果科学家通过转基因工程，成功地把一位女性血友病患者的造血干细胞进行改造，使其凝血功能恢复正常。那么，她后来所生的儿子中(　　)

A．全部正常 B．一半正常 C．全部有病 D．不能确定

30．重组人胰岛素原基因生产胰岛素，首先要获得目的基因，但一般不用下面哪种方法（? ）A．利用聚合酶链式反应，扩增需要的目的基因

B．用化学方法合成目的基因

C．构建基因文库，从文库中调取目的基因

D．直接从细胞内总DNA中分离目的基因

31．某环状DNA分子共含2000个碱基，其中腺嘌呤占30%，用限制性核酸内切酶BamHI(识别序列为
）完全切割该DNA分子后产生2个片段，则下列有关叙述中，正确的是（ ）

A．一个该DNA分子连续复制2次，共需游离的胞嘧啶脱氧核苷酸1600个

B．含BamH I的溶液中加入双缩脲试剂A震荡后即出现紫色

C．一个该DNA分子含有2个BamH I的识别序列

D．一个该DNA分子经BamHI完全切割后产生的核酸片段，共含有8个游离的磷酸基团

32．下列有关培育转基因动物的相关叙述，正确的是(? )

A．整个培育过程的设计和施工都是在细胞水平上进行的

B．转基因动物的培育成功，表明科学家可打破物种界限，定向改造生物性状

C．培育转基因动物所需的目的基因都是从供体细胞中直接分离得到的

D．转基因动物与原动物相比，由于发生了基因突变而使其基因型发生了改变

33．基因治疗是人类疾病治疗的一种崭新手段，下列有关叙述中不正确的是（?）

A．基因治疗可使人类遗传病得到根治

B．基因治疗是一种利用基因工程产品治疗人类疾病的方法

C．把正常基因导入病人体内属于基因治疗的一种方法

D．基因治疗的靶细胞可以是体细胞和生殖细胞

34．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。以下有关叙述，正确的是（ ）

A．可用基因枪法将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵

B．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，大于凝血因子氨基酸数目的3倍

C．在该转基因样中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中

D．人凝血因子基因开始转录后， DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA

35．下图表示利用基因工程培育抗虫棉过程的示意图，与该图相关描述不正确的是（?）

A．该技术的理论基础之一是基因重组

B．上图过程需要用到的工具酶有DNA连接酶、限制性核酸内切酶、纤维素酶、解旋酶、DNA聚合酶

C．培育成功的该植株细胞中含有一个携带目的基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因自交产生F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的3/4

D．图中合成的多肽，其前三个氨基酸为甲硫氨酸（AUG）丙氨酸（GCU）丝氨酸（UCU）

36．关于下列黏性末端的描述，正确的是（ ）

A．限制性核酸内切酶切割DNA形成④时需要脱去2个水分子

B．DNA连接酶与DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端

C．①和④的黏性末端不同，一定是由不同的限制性核酸内切酶切出

D．①与③的黏性末端相同，一定是由相同的限制性核酸内切酶切出

37．科学家在某种农杆菌中找到了抗枯萎病的基因，并以质粒为运载体，采用转基因方法培育出了抗枯萎病的金花茶新品种。下列有关说法，正确的是（??）

A．质粒是最常用的载体之一，质粒的存在与否对宿主细胞生存有决定性的作用

B．通过该方法获得的抗枯萎病金花茶，将来产生的花粉中不一定含有抗病基因

C．该种抗枯萎病基因之所以能在金花茶细胞中表达，是因为两者的DNA结构相同

D．可以用氯化钙处理植物细胞，使其细胞壁的通透性增加，从而增加导入的成功率

38．下列说法错误的是 （???）

A．科学家通过对胰岛素的改造，已经使其成为速效型药品

B．我们可以将蛋白质工程应用于微电子方面

C．用蛋白质工程方法制成的电子元件具有体积小，耗电少和效率高的特点

D．蛋白质工程成功的例子不多，主要是因为蛋白质种类太少，原料不足

39．下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，有关说法错误的是（ ）

A．A
B过程中一般用4种脱氧核糖核苷酸为原料，并加入两种引物

B．A
B过程利用了DNA复制原理，需要使用耐高温的DNA聚合酶

C．
为转基因绵羊的培育过程，常选用的受体细胞是卵母细胞

D．B
D为转基因植物的培育过程，其中④过程常用的方法是农杆菌转化法

40．限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关说法错误的是（?）A．在相同的DNA分子中a酶的识别位点一般明显要比b酶多

B．能被a酶识别并切割的序列也能被b切割

C．a酶与b酶切断的化学键相同

D．将大量a酶和b酶切割后的片段混合，重新连接后的DNA片段不一定全能被b切割

二、非选择题（本题共7个小题，共40分）

1．(5分)下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：

(1)在基因工程中，A→B为 技术，利用的原理是 ，其中①为_____过程。

(2)B→C为抗虫棉的培育过程，其中③过程常用的方法是________。要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：____________________________________________________

______________________________。

2．(4分)降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如图。

在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：

(1)Klenow酶是一种____________________酶。

(2)获得的双链DNA经EcoR Ⅰ(识别序列和切割位点—G↓AATC—)和BamH Ⅰ(识别序列和切割位点—G↓GATCC—)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。

①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它 。

②要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有________。

(3)经DNA测序说明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是______________________________________ _____________。

3．(5分)酵母菌的维生素、蛋白质含量高，可生产食品和药品等。科学家将大麦细胞的LTP1基因植入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌种可产生LTP1蛋白，并酿出泡沫丰富的啤酒。基本的操作过程如下：

(1)该技术定向改变了酵母菌的性状，这在可遗传变异的来源中属于________。

(2)从大麦细胞中可直接分离获得LTP1基因，还可采用________方法获得目的基因。本操作中为了将LTP1基因导入酵母菌细胞内，所用的运载体是________。

(3)此操作中可以用分别含有青霉素、四环素的两种选择培养基进行筛选，则有C进入的酵母菌在选择培养基上的生长情况是____________________________________________

________________________。

除了看啤酒泡沫丰富与否外，还可以怎样检测LTP1基因在啤酒酵母菌中的表达？

_________________________________。

4．（6分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶

BamH I

Hind Ⅲ

EcoR I

Sma I



识别序

列及切

割位点

ATCC

CCTA

GCTT

TTCG

ATTC

CTTA

CCGG

GGCC





(1)一个图l所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有______个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越_______。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_________

__________________________________________。

(4)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_________酶。

(5)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________________________________。

(6)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

5．(4分)利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。青岛“崂山奶山羊乳腺反应器研制”项目通过鉴定，该项目产生的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生干扰素、乙肝表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品，造福人类。

请根据这一科技成果的研究过程回答问题：

研究人员用DNA测序仪显示了基因组的某DNA片段一条链的碱基排列顺序图片。其中图1的碱基排列顺序已经解读，基顺序是：GGTTATGCGT，请解读图2显示的碱基排列顺序：____________________________________________。

(2)在基因工程操作过程中，基因工程的核心是________________________。

(3)如何检测和鉴定目的基因已被成功导入羊体内？请写出两种方法。

， 。

6．(8分）如图为某种质粒表达载体简图，

小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、Bam HⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、Bam HⅠ在内的多种酶的酶切位点。据图回答：

将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________________、___________________________、________________三种。

用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________

_________________________________。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是_________，其合成的产物是______。

(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是___________________________。

7．（8分）萤火虫能发光是因为萤火虫体内可以通过荧光素酶催化的系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也能使植物体发光，一直以来荧光素酶的唯一来源是从萤火虫腹部提取的。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过基因工程实现了将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内生产荧光素酶。

请你根据已知的知识回答下列有关问题：

(1)提取目的基因通常有两种途径，提取该目的基因的方法最可能的途径是_______。

(2)在该过程中需要多种酶的参与，其中包括_______________________________等。

(3)下列可作为受体细胞的生物有(多选)(　　)

A．土壤农杆菌 B．结核杆菌 C．噬菌体 D．枯草杆菌

(4)在此转基因工程中，是由质粒承担运载体的。在将体外重组DNA插入大肠杆菌体内之前通常要用________处理大肠杆菌，目的是______________________________。

(5)由于荧光素酶的特殊作用，人们一直设想将其基因作为实验工具，将它和某一基因连接在一起导入植物体内，如固氮基因连接在一起导入植物体内，判断固氮基因是否导入的方法是________________________________。

(6)与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是________________________和________________________。